转膜仪膜的选择维修维保基础
转膜仪是用来转印蛋白的仪器。电泳转印为转移蛋白Z常用的方法,该技术有效、迅速,并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程,即是电泳转印法。因为此技术往膜上转印蛋白GX、快速和准确,并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。因此在转移印迹技术中得到广泛的应用。
Western blot的成败取决于杂交膜的选择。合适材质、孔径和规格的杂交膜应当以杂交方案、被转移蛋白的特性以及分子大小等因素为依据来选择适合的。
选择根据
1、后续的显色检测不会受到膜的孔径以及目的蛋白分子的结合能力的影响。
2、若后继实验有其他要求,转移膜需要按照不同目的来挑选。
PVD膜和酸纤维素膜(NC)为两种主要的用于 Western blot的膜。
PVD膜
相比于常规的膜,PVDF膜具有更加高的蛋白亲和力、分辨率以及灵敏度,对于检测低分子量相当的适合。然而必须使用纯甲醇在使用之前将PVDF膜浸泡饱和1-5s。
PVD膜:和蛋白质之间有着相当高的亲和力,必须使用纯甲醇在使用之前浸泡PVDF膜,利用活化膜上的正电基团,使其与带负电荷蛋白结合更容易。
NC膜
NC膜是蛋白印迹实验的标准固相支持物,大多数带负电荷的蛋白质在低离子转移缓冲液的环境下会与膜发生疏水作用,使得亲和力变高而结合在一起,然而通过非离子型的去污剂作用,能够洗脱结合的蛋白。
不同孔径的NC膜按照被转移的蛋白分子量大小的差异进行选择。膜会随着膜孔径的不断减小而越牢固地结合低分子量蛋白。一般的NC膜有0.45um和0.2um两种规格。如果蛋白<20kD,那么膜就使用0.2um的,如果蛋白大于20kD,那么膜就使用0.45um的。
NC膜:依靠疏水作用,:NC膜与蛋白质结合,预先活化没有必要,微微影响蛋白质的活性,非特异性本底显色浅,有着低廉的价格和方便的操作。然而洗涤时容易丢失结合在NC上的小分子蛋白质,NC膜有着不是太好的韧性,容易受到损毁。